[摘要] 目的 探討不同年齡白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)中caspase-3、Fas/FasL的表達(dá)及臨床意義。 方法 選擇2007年9月～2012年2月本院眼科收治的白內(nèi)障患者50例為研究對象，其中25～49歲設(shè)為白內(nèi)障中青年組，≥50歲設(shè)為白內(nèi)障老年組，各25例，并收集20例成人尸體解剖非白內(nèi)障眼球?yàn)閷φ战M，其中25～49歲設(shè)為中青年對照組，≥50歲設(shè)為老年對照組，各10例。采用免疫組織化學(xué)法檢測各組晶狀體前囊膜組織中caspase-3、Fas、FasL的表達(dá)。 結(jié)果 白內(nèi)障老年組、白內(nèi)障中青年組、老年對照組和中青年對照組LECs中凋亡細(xì)胞百分率分別為34.0%、16.0%、2.0%、3.0%，白內(nèi)障老年組顯著高于白內(nèi)障中青年和老年對照組，白內(nèi)障中青年組顯著高于中青年對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。白內(nèi)障老年組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率分別為84.0%、60.0%、68.0%，白內(nèi)障中青年組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率分別為44.0%、24.0%、32.0%，老年對照組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率分別為10.0%、10.0%、20.0%，中青年對照組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率分別為10.0%、0.0%、0.0%，4組caspase-3、Fas、FasL蛋白陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。老年白內(nèi)障患者和中青年白內(nèi)障患者中，LECs凋亡與caspase-3和Fas、FasL表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r=0.621、0.583、0.621，P<0.01)。 結(jié)論 老年性白內(nèi)障形成過程可能與LECs的凋亡及caspase-3、Fas/FasL的表達(dá)調(diào)控有關(guān)。

　　[關(guān)鍵詞] 白內(nèi)障;caspase-3;Fas;FasL;晶狀體上皮細(xì)胞

　　[中圖分類號] R776.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721(2014)11(a)-0015-03

　　白內(nèi)障是目前世界上第一位致盲眼病，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前臨床上尚無切實(shí)有效的預(yù)防藥物。因此，通過各種先進(jìn)研究技術(shù)的綜合應(yīng)用深入白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制，抓住凋亡相關(guān)基因在白內(nèi)障發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制從而研發(fā)相關(guān)分子作用靶點(diǎn)，已成為一項(xiàng)十分有益于防治白內(nèi)障的課題[1-2]。caspase是一組半胱氨酸蛋白酶家族，近年來相關(guān)資料顯示，caspase-3可能參與了白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells，LECs)的凋亡和白內(nèi)障的形成[3-4]。目前對Fas/FasL系統(tǒng)的凋亡機(jī)制研究多數(shù)集中于其在腫瘤發(fā)病機(jī)制中的作用及意義[5-6]，而對該系統(tǒng)在白內(nèi)障發(fā)生過程中的作用機(jī)制尚不明確[7]。本研究通過免疫組織化學(xué)法對不同年齡白內(nèi)障患者及正常人的晶狀體上皮中caspase-3、Fas/FasL的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，旨在初步探討caspase-3、Fas/FasL在不同年齡白內(nèi)障發(fā)生過程中所具有的分子生物學(xué)功能，為預(yù)防白內(nèi)障發(fā)生及開發(fā)更有效的藥物治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和思路。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料

　　收集2007年9月～2012年2月本院眼科收治的白內(nèi)障患者50例為研究對象，其中25～49歲設(shè)為白內(nèi)障中青年組，≥50歲設(shè)為白內(nèi)障老年組，各25例。其中白內(nèi)障中青年組，男14例(14眼)，女11例(11眼)，年齡25～47歲，平均(35.6±1.6)歲;白內(nèi)障老年組，男13例(13眼)，女12例(12眼)，年齡50～79歲，平均(62.4±2.6)歲。兩組患者均在常規(guī)白內(nèi)障顯微手術(shù)過程中采用連續(xù)環(huán)形撕囊，晶狀體前囊膜的直徑約為5 mm。另選擇暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科進(jìn)行成人尸體解剖的眼球晶狀體前囊膜標(biāo)本20例，均證實(shí)無白內(nèi)障發(fā)生，其中25～49歲設(shè)為中青年對照組，≥50歲設(shè)為老年對照組，各10例。4組晶狀體前囊膜標(biāo)本均經(jīng)10%中性緩沖甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片。

　　1.2 方法

　　1.2.1 TUNEL方法檢測細(xì)胞凋亡 采用TUNEL法檢測4組晶狀體前囊膜標(biāo)本中的細(xì)胞凋亡情況。TUNEL法試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，操作方法及過程嚴(yán)格按照試劑盒要求步驟進(jìn)行。檢測結(jié)果判定：光鏡下觀察，LECs細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒者為凋亡細(xì)胞，而染為藍(lán)色的細(xì)胞核為正常LECs細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取5個視野，每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，計(jì)算凋亡細(xì)胞百分率：細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

　　1.2.2 免疫組織化學(xué)檢測 采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測各組LECs中caspase-3、Fas/FasL的表達(dá)。操作方法及過程嚴(yán)格按照EnVision法試劑盒要求步驟進(jìn)行。染色結(jié)果判斷[6]：LECs胞質(zhì)或胞膜內(nèi)見黃色或棕色顆粒為染色陽性。每張切片隨機(jī)選擇檢查5個視野，計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞率。0～5%為(-);6%～19%為(+);20%～35%為(++);36%～50%為(+++)。(+)～(+++)記為陽性。

　　1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

　　采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，各指標(biāo)之間的關(guān)系分析采用等級相關(guān)檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　2.1 4組LECs凋亡情況的比較

　　白內(nèi)障老年組、白內(nèi)障中青年組、老年對照組和中青年對照組LECs中凋亡細(xì)胞百分率分別為34.0%、16.0%、2.0%、3.0%，4組凋亡細(xì)胞百分率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.82，P<0.01)。白內(nèi)障老年組顯著高于白內(nèi)障中青年組和老年對照組(χ2=9.27、11.59，P<0.01)，白內(nèi)障中青年組顯著高于中青年對照組(χ2=7.59，P<0.01)。

　　2.2 4組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白陽性表達(dá)的比較

　　白內(nèi)障老年組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率分別為84.0%(21/25)、60.0%(15/25)、68.0%(17/25)，白內(nèi)障中青年組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率分別為44.0%(11/25)、24.0%(6/25)、32.0%(8/25)，老年對照組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率為10.0%(1/10)、10.0%(1/10)、20.0%(2/10)，中青年對照組LECs中caspase-3、Fas、FasL蛋白的陽性表達(dá)率為10.0%(1/10)、0.0%、0.0%，4組caspase-3、Fas、FasL蛋白陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.19、8.43、9.11，P<0.01)。

　　2.3 LECs凋亡與caspase-3和Fas、FasL表達(dá)之間的關(guān)系

　　25例老年白內(nèi)障患者和25例中青年白內(nèi)障患者中，LECs凋亡與caspase-3和Fas、FasL表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r=0.621、0.583、0.621，P<0.01)。

　　3 討論

　　近年來研究表明，LECs的損害是白內(nèi)障發(fā)生過程中的早期事件，除先天性白內(nèi)障以外，其他類型的白內(nèi)障形成均與LECs發(fā)生凋亡密切相關(guān)。推測LE